序言：作為思想的載體和知識的探索者，寫作是一種獨特的藝術，我們為您準備了不同風格的5篇養生保健服務，期待它們能激發您的靈感。

篇1

關鍵詞:中醫養生保健;服務貿易;商業存在;貿易壁壘

與傳統中醫的診療服務不同，中醫養生保健服務更具有“簡、便、驗、廉”的特點和優勢，容易為東道國成員所接受，因此，發展中醫養生保健服務貿易，是中醫藥服務貿易快速發展的主要途徑之一。但是，中醫養生保健服務貿易在市場準入方面遭遇了諸多貿易壁壘。

一、中醫養生保健服務貿易市場準入概述

（一）中醫養生保健服務貿易模式

中醫養生保健服務貿易的提供模式主要有四種：跨境交付、境外消費、商業存在和自然人流動。在中醫養生保健服務貿易中，其服務提供模式往往不是單一的。在全球化和信息時代，商業存在日益成為中醫藥養生保健服務貿易的主力軍，成為中醫養生保健服務在海外得以長久存在的主要戰略支撐。

（二）市場準入面臨的非關稅壁壘

中醫養生保健服務貿易市場準入，是指一國允許中醫養生保健服務進入本國的條件、門檻和制度。由于服務貿易的無形性，一國為保護本國的服務市場，通常會采取一些非關稅壁壘措施，消除或降低對本國的影響，主要表現為對中醫養生保健服務貿易市場準入的限制。

（三）中醫養生保健服務貿易發展現狀

隨著生活水平提高，民眾對養生保健開始越來越關注，再加上國際上“回歸自然”浪潮的興起，中醫養生保健在世界范圍內正備受矚目。現階段，中醫養生保健服務貿易在商業存在模式下有以下特點：1．服務機構數量有限：中醫養生保健服務機構是傳播中醫保健服務的有生力量，但是目前中醫養生保健機構數量有限，能夠走出國門的中國養生保健服務機構更少。規模相對較大，如瑞士蓮福中醫藥集團，在瑞士和美國開設了21家連鎖醫療中心，開展針灸，推拿服務，并創建“聯中藥廠”為其所屬診所提供重要保健品和養生藥茶。這樣的機構并不多見。2．從業人員輸出規模小：近年來,世界中醫學聯合會和瑞士中醫集團、洛桑中醫診所、歐洲中醫基金會以及阿曼蘇丹國開展中醫醫療、保健、教育等開展國際人才交流與合作，建立了一些長期合作關系的中醫人才派出渠道。總體上，中醫養生保健服務從業人員輸出規模較小。

二、中醫養生保健服務貿易市場準入壁壘問題

服務貿易的無形性和不可儲存性決定了其壁壘表現形式只能是非關稅壁壘，一方面是對中醫養生保健服務機構在市場準入方面的限制，另一方面是對從業人員資質及其跨國執業方面的法律規制。

（一）市場準入壁壘

以澳大利亞為例，目前澳大利亞有5000多家診所，其中中醫診所比較少。中醫保健、針灸等是西醫從業人員的輔助治療方式，目前有3000個西醫診所內設立針灸治療項目。澳洲政府近年來通過語言、專業對中醫、針灸師開始啟動注冊，限制了相關保健醫師從業資格，影響了一些中醫診所的正常營業。

（二）從業人員市場準入壁壘

1．澳大利亞對中醫養生從業人員市場準入限制：作為“補充醫學”的中醫養生保健服務，近年來在澳大利亞受到了一定限制。據統計，澳大利亞約有4500名針灸、中醫師，雖然中醫針灸服務在澳洲已經被廣泛認可，但是自2012年7月1日開始，澳洲通過對境內的中醫、針灸師頒發許可證來限制醫師的行醫范圍和對象，這使得近90%中醫難以在澳洲獨立行醫。澳洲醫學會對上千名會員統計，目前通過注冊者僅為13%，有條件注冊者為87%，其中限制注冊者為25%。對中醫、針灸師的法律限制將阻礙中醫養生保健從業人員在當地醫院、診所的執業。2．美國對中醫養生從業人員的市場準入限制：中醫養生保健服務在美國是補充和替代醫學（以下簡稱CAM）。近年來，美國接受CAM治療人數正逐年增加。據調查1997-2002年5年間，CAM療法呈穩步增長趨勢，最長用的有肌肉松解療法（14.2%）和按摩療法（7.4%）。隨著中醫保健在美國市場的不斷升溫，美國各州開始針對中醫保健醫師的從業資格進行一定考核。目前美國50個州中有44個州對針灸師通過按期完成繼續教育學分的方式頒發針灸執照。美國成立的東方醫學資格認定委員會，對相關中醫保健從業人員資格進行認定管理。這些管理活動對中醫養生保健從業人員構成了間接限制。

三、中醫養生保健服務貿易市場準入壁壘在GATS框架下的分析

在GATS框架下，服務貿易的兩道關卡是市場準入和國民待遇。兩者聯系緊密，市場準入是適用國民待遇的前提，國民待遇又是市場準入的保證。中醫養生保健服務貿易的市場準入，主要是“開業權”和服務提供者資格的問題。

（一）市場準入

在商業存在服務模式下，中醫養生保健服務貿易壁壘主要表現為限制服務機構設置和限制服務提供者資格及流動等。前者主要表現為設置較高的門檻或限制開業權等。這種壁壘涉及到養生保健服務提供商在本國的存在及允許參與的程度；中醫養生保健外籍雇員市場準入方面的壁壘主要為對從業人員入境手續和就業許可方面的限制等。為了減少貿易壁壘推進服務貿易自由化，GATS限制成員方在服務貿易中設置市場準入方面設立壁壘。市場準入在GATS并非一般性義務，而是根據承諾表承擔特定的義務。具體到健康保健服務領域，一成員方在市場準入方面所做的承諾，涉及到該成員方是否允許其他成員的健康保健服務和服務提供者進入本國服務市場及進入程度問題。合法管理與市場準入壁壘有時候難以區分，構成市場準入的主要障礙。非關稅壁壘通常規定在各國對國際服務貿易的管理性法規之中，并且經常以合法管理的名義出現。以澳大利亞為例，對中醫保健服務人員進行從業資格管理，影響到了從業人員的正常執業。看似合法的管理措施，使得近90%中醫難以在澳洲獨立行醫。如此大比例中醫保健從業人員的失業，也很難說不是澳洲對中醫養生保健服務從業人員設置的貿易壁壘。

（二）國民待遇

與市場準入相同，國民待遇也不屬于GATS成員國的普遍義務，而是特定義務。各成員國須在自己承諾開放的健康保健服務部門中給予外國保健服務和保健服務提供者以國民待遇。國民待遇方面的壁壘主要體現為服務主體進入一國市場后采取的限制措施。在中醫養生保健服務領域，表現為對保健服務從業人員的歧視性措施。例如，征收更高的稅費，以及對外籍保健從業人員要求更高級別的專業證書等。

四、減少中醫養生保健服務貿易市場準入壁壘的對策

（一）加強國際談判減少壁壘

推動中醫養生保健服務貿易，減少貿易壁壘是關鍵。具體來說，一方面可以在GATS框架下，擴大各國具體承諾義務來限制健康保健領域壁壘，另一方面也可以尋求國際法方面的保護，通過國際條約保護中醫養生保健服務貿易。1．通過談判擴大成員方具體承諾：按照GATS的規定，一個成員對市場進入的具體承諾，均需經過談判，逐項列入“具體承諾表”中。具體承諾是成員方按不同的服務提供方式，就市場準入和國民待遇及其他影響服務貿易的措施，在服務部門或分部門的適用范圍和條件所做的承諾。例如，中醫養生保健服務主體資格的認定方面，鑒于實踐操作中承認服務提供者資格的復雜性，如涉及保健機構從業許可證、營業執照以及從業人員資格、證書等問題，GATS規定可通過雙邊或多邊協議解決或成員自行單方面宣布完成。因此，在GATS框架下，加強成員各方之間的雙邊或者多邊談判，有助于確立中醫養生保健服務主體資格的統一標準，擴大各成員方在中醫養生保健主體市場準入方面的承諾義務。2．通過談判加強國際立法：中醫養生健服務貿易的快速發展，需要在國際法律層面予以支持和保護，可以通過簽署多邊國際條約、諸邊國際條約或雙邊國際條約實現。中國作為經濟和政治大國，與世界上主要國家和地區存在著密切的貿易和投資關系，簽訂了大量的雙邊、諸邊貿易和投資條約。我國各主要相關部門有必要在國際重要談判和條約中，有意識地通過條件互換或其他形式，為中醫養生保健服務進入其他國家開辟合法通道。

（二）積極推進中醫養生保健國際服務標準建設

發展中醫養生保健服務貿易，減少各國在市場準入方面的壁壘，需要有一個國際通行的服務標準。“明確、統一、確定、可驗證”的服務標準，成為開展中醫養生保健服務貿易的核心問題之一。在我國國內“國家標準、行業標準和企業標準”三級標準體系下，中醫養生保健服務貿易企業應團結一致，推動有關國際標準的出臺。此外，國際標準化組織（ISO）在世界范圍內有著廣泛的影響，中國中醫養生保健管理部門和行業組織應當積極參與中醫養生保健國際標準體系的制定，為中醫養生保健服務標準建立國際標準，消除分歧。“一帶一路”為中醫養生保健服務的國際談判和標準制定帶來了契機。在中國與澳大利亞、匈牙利等國的雙邊談判中，簽訂了新的中醫藥合作協議；通過各國談判協商，國際標準化組織《一次性使用無菌針灸針》的國際標準。中醫養生保健國家管理機構及相關部門應積極參與到各國及區域間的雙邊及諸邊談判中去，為確立中醫養生保健服務標準努力。

綜上所述，在商業存在模式下，解決中醫養生保健服務貿易的市場準入法律問題，需要中醫藥界和法律界、政府和民間、外交和經濟部門等多方的共同努力。

作者:楊逢柱 王 芳 單位:北京中醫藥大學人文學院 北京航空航天大學法學院

參考文獻：

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[3]司富春、宋雪杰、高燕．我國中醫養生保健發展的現狀及思考．中醫研究．2013，26（7）．

[4]劉薇．WTO對法律服務貿易的規制及中國應對．中國政法大學碩士論文．2010．

[5]木泉．中國國際旅游服務貿易法律問題研究．中國政法大學碩士學位論文．2011．

篇2

×做好婦女兒童保健工作

×我們（）鎮地處北票城郊，現有個行政村，總人口萬，有周歲育齡婦女人，其中已婚育齡婦女人，采取措施的人，節育措施落實率；年月份新出生嬰兒人，其中：男孩人，女孩人，人口出生率、自然增長率分別為千分之和，計劃生育率達，嬰兒出生性別比為：，低于規定指標，我們的主要做法有以下幾個方面：

×一、注重“三優”知識的普及與推廣

×鎮黨委、政府高度重視“三優”知識的普及。組建了優生、優育指導分會參與部門為衛生辦、計生辦。并把這項工作納入建設新型生育文化的組成部分。

×為把“三優”知識的普及做為計生工作開展優質服務的一項主要活動內容，常抓不懈，采取重點培訓與分類指導相結合，集中組織與分散培訓相結合，電化教育與發放明白紙、熱線咨詢相結合的做法，效果較為顯著，近三年來共培訓業務骨干人次，與衛生辦和鎮醫院聯合印制下發圖文并茂的“三優”知識宣傳折頁萬份，自制“三優”知識宣傳品、宣傳單萬張，并為各村統一配制“三優”知識光盤套，基本上形成了“三優”知識電教化和“三優”知識的普及。版權所有

×二、強化二胎生育指標審批的監督

×為做好這項政策性強的工作，我們采取了事前公示制，并把這項工作做為計生村務公開的主要內容，每年的第一季度，各村把應批標對象全部公開上墻，接受群眾監督，自年至今全鎮共審批二胎生育指標例，無一例錯批。其中：五間房村審批二胎生育指標人。

×三、深入開展綜合治理出生人口性別比工作

×為切實把治理出生人口性別比偏高這件事做好、做細，做出成效，鎮政府與轄區內醫療單位、民辦診所、執業機構全部簽訂了合同書，共簽訂合同書份，印制宣傳單份，并在第五人民醫院開展了治理性別比百日會戰宣傳日活動，設法律咨詢，生殖保健，優生優育咨詢臺個，發放宣傳單多份，為過往群眾釋疑答問咨詢服務人次，受到群眾的好評，由此拉開了治理性別比偏高的序幕，年月份全鎮新出生人口性別比為：，使我鎮出生人口性別比趨于正常。

×四、強化生殖保健服務

×針對廣大育齡群眾的愿望和需求，我們始終把為育齡群眾提供人溫馨和諧的服務做為計生工作的切入點，盡最大努力，克服困難來滿足育齡群眾的要求，一是搶抓時機。今年春季利用農閑我們邀請市技術服務站技術人員來我鎮做生殖健康檢查；二是舍得投入。在鎮村財力緊張的情況下，為育齡群眾生殖健康檢查提供免費服務，僅此直接支付元。三是效果顯著。在全鎮名已婚育齡婦女當中有人接受了生殖健康免費檢查，普查率為，查出各種婦科疾病人數為人。（其中五間房村普查率）深受群眾的歡迎。

×五、計生優質服務圍繞婦女兒童保健開展工作。

×在我鎮計生優質服務工作中，積極配合各級婦聯組織，為婦女兒童提供快捷、方便、實質的服務。具體表現為一是為每年出生左右的孕產婦提供“三優”服務和缺陷兒干預工程的服務，在近三年出生近千人中，病殘兒出生僅有例，與過去相比有較大幅度下降；二是在生殖健康服務中采取了跟蹤服務，分類管理，配合治療的做法，對患病人員建立檔案，指導患病婦女選擇最佳治療方式等收到了明顯效果。到目前在查出的名患者中已有人治愈。其中五間房村已有人治愈康復。受到婦女姐妹的贊譽。

×盡管計生優質服務為婦女兒童保健工作做了一些努力和償試，也受到了廣大婦女的認同，但我們深知在具體的工作中與先進單位相比和上級領導的要求，特別是婦女姐妹的希望相差甚遠。因此我們將在今后的工作中，積極借鑒兄弟單位的經驗做法，努力做到取長補短，同時以更加嚴肅認真的態度，貫徹落實上級領導部門的指示精神，履行好我們的職責，為婦女兒童保健工作做出努力。

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××（）計生辦

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【關鍵詞】云南省 小語種 老撾語

【中圖分類號】H411 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-4810（2013）17-0073-02

隨著云南省橋頭堡建設的不斷推進以及云南省和東盟國家之間基礎設施建設的不斷完善，對小語種人才的需求也日益增多，小語種成了社會、家長和學生的“香餑餑”，但本人通過對老撾語已畢業學生以及在老撾投資企業的調查發現，大部分學生都覺得在學校學的在工作中很少能應用得到，很多企業也覺得學校在培養小語種學生時課程結構太單一，很多學生知識面太窄，應有針對性地開設相關課程。基于以上原因，作為一名小語種教師，本人對小語種人才的培養（以老撾語為例）從學校和學院、教師以及學生三方面做了一些思考。

一 學校和學院應為小語種人才的培養創造良好的條件

在老撾投資的企業大部分都是開礦、水利水電開發、農業開發、基礎設施建設等，如果學生不擴大自身的知識面和能力，在企業里就不可能有發展，只能一直充當翻譯的角色，所以學校和學院在以下幾個方面應該給學生建立一些基礎。

1.學校在小語種學院公共課的設置上應區別于其他學院

通過本人對在老撾投資的許多企業負責人的調查發現，他們希望學生在校的時候能多學一些財務、人力資源管理、國際貿易、物流、國際法、稅收等知識，而不是單純的語言。在老撾投資的企業，財務系統都是老撾的財務系統，財務用中國人又有語言問題，現在在老撾工作的畢業生財務方面都是邊管邊學，如果學生在校期間有相應的基礎，畢業之后再經過企業在老撾的專門培訓加上自身的語言優勢很快就能掌握；在老撾的勞動力基本上都是老撾人，如果學生在校期間對管理有一定的理論基礎，加上工作后的實踐，無疑又給自己在企業的發展增添了一樣法寶，這也正是企業想要的人才。另外，在法律、物流、稅收等方面在校期間同樣要有扎實的理論基礎，特別是法律方面，不管是老撾的法律、中國的法律，還是國際法律都應該有一定的了解。

2.學校、學院應加強對小語種學生英語的教學

據本人調查發現，目前各高校英語的教學大部分是針對大一、大二的學生，而且每周的課時也非常少，大部分只能靠學生的自學，而這部分學生只占少數，學院應對小語種學

生每年的英語四、六級過級做出相應的要求，必要時應制定相關的規章制度，比如，大一、大二英語沒有過四級的不給予出國學習，過了六級的給予相關的獎勵，組織并鼓勵學生參加各級別的英語比賽等，以此來幫助學生的英語學習。東南亞國家英語普及程度相對較高，小語種中有很多的外來詞都是英語，加強英語的學習以及培養對英語學習的興趣對提高東南亞語種的學習很有幫助，而且現在的用人單位對小語種學生的英語水平要求也很高，在老撾投資的很多央企、國企以及其他很多公司過來招人的時候明確要求英語要過四級或六級才能進入面試，因此，英語在一定程度上也成了小語種學生就業的敲門磚。

3.學院應支持并組織小語種學生和東南亞學生的交流

學生在課堂上學了之后不說、不用很快就會忘記，學了之后就去說、去用，很快就會記住單詞，而且在使用的過程中又會發現新的問題，這樣在學習的時候就很有目的。這一點上可以借鑒英語角，很多英語專業的學生畢業后使用英語工作的大部分都是從英語角或類似于英語角這樣的交流中學出來的，在交流中他們發現問題、解決問題，而且能從交流中獲得一種自豪感，就加大了學習外語的興趣。隨著現在東南亞學生在昆明學習人數的不斷增多，應利用好這一資源，其實東南亞國家的留學生也有這一方面的需求，他們也想結交中國朋友，幫助他們學習中文，而各高校中學習小語種的學生應該就是最佳人選了。以老撾留學生為例，目前老撾留學生在昆明學習的就有三四百人，他們就讀于不同的高校，由老撾留學生協會統一管理，學院應與類似老撾留學生協會的其他東南亞留學生組織建立聯系，定期為學習東南亞語種的學生和東南亞國家的留學生創造相互學習、相互交流的機會，這樣對學生口語的提高、專業的學習以及對對象國文化、風俗的了解都將會起到非常重要的作用，在這期間，東南亞國家的留學生的中文、對中國文化的了解也會不斷地提高。

二 教師應加強學習研究并為小語種人才的培養注入新的活力

1.加強自身的學習

根據小語種學生畢業后的就業方向，加強在這些領域的學習。比如老撾語的學生畢業后基本上都是到水利公司、橡膠公司、農業類公司、礦產公司等就業，教師就應該有針對性地進行教學，加強對這些方面知識的學習以及學習這些領域的相關詞匯或引導學生往這些方面學習，讓學生在校期間對這些知識、詞匯有一定的了解。

2.結合實際，加強小語種教材的編寫

目前，小語種教材大部分都面臨著教材老化的問題，與實際結合的很少。以老撾語教材為例，目前各書店銷售的老撾語教材非常少，而且用的教材都是很早以前編寫的，跟學生畢業后實際工作結合的很少。因此，教師應加強與東南亞高校教師以及國內高校教師的合作，加緊東南亞語種教材的編寫工作，加強教材的適應性。

3.加強和往屆畢業生的交流，必要時應開展相關的調研

小語種人才的培養不能按部就班地進行，社會以及用人單位每年對學生的要求都不同，因此也就要求教師在教學過程中應適應這種變化，教學內容該怎么變，該變什么，這些答案都可以從往屆畢業生中找到答案，比如說在老撾投資的企業主要集中在農業、水利、礦藏、貿易等方面，教師在教學過程中就應從這些方面進行老撾語教學，當然這些都需要教師自身不斷學習，必要時應跟往屆生學習，教師把這些信息傳遞給在校學生，學生畢業之后就能很快進入工作狀態，知識面也就不會太狹窄了。當然除了語言方面，往屆畢業生也會反饋他們工作之后遇到的問題，教師把這些共性問題又反饋給在校生，這樣就把這些問題在在校期間解決了，培養出學生的質量也就會越來越好。往屆畢業生是一個很好的資源，他們能結合實際幫助教師在小語種教學過程中解決很多實際問題，從而提高小語種學生的知識水平和就業實力。

三 學生應加強自學意識并努力擴寬自己的知識面以及培養各方面的能力

1.學生應加強自學意識，不能只滿足于教師的課堂教學

課堂教學的時間畢竟有限，教師介紹的知識也不可能面面俱到，學生應用好網絡以及在昆明學習的東南亞學生等資源以提高專業和加深對對象國歷史、文化等各方面的了解。中國駐老撾大使館網站上有很多中老合作、中老互訪、老撾經濟政策、老撾風土人情等信息；通過大使館網站又可鏈接老撾國會、外交部、商務部、老撾人民報等網站，在學習老撾語的同時能及時了解老撾黨和政府的相關政策；中國國際廣播電臺網頁有很多資料和聽力材料。另外，目前在昆明學習的東南亞學生很多，學生應多去跟這些留學生交流，互相學習，相互提高。學校、學院的圖書館內有很多介紹對象國文化、風俗以及其他方面的書籍，學生自己應強制要求自己一個月最少要看完兩本對象國的書籍，在了解對象國相關情況的同時也豐富自己的詞匯。

2.在打好專業基礎的同時，不斷擴寬自己的知識面

很多已參加工作的小語種學生都反饋回一個問題，就是覺得小語種學生的知識面太窄，只會對方的語言，其他方面的知識太弱，如對對象國的歷史、文化、風俗等了解甚少。這些問題都是跟學生在校學習時自學意識和學習主動性不夠有關，學生應通過現在的網絡和資格培訓以及各個高校的資源，如各高校開設的講座等去拓寬自身的知識面，而不能只滿足于只局限于專業知識。老撾語的學生到外企工作之后，公司都會對學生進行會計、財務等培訓，如果學生在校期間對會計、財務等知識有所了解，通過會計、財務等的資格考試，工作之后就能很快上手，自身的綜合能力也會有所提高。

3.通過在校時的各類活動以及社會活動等培養自己各方面的能力

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關鍵詞：半夏；懸浮細胞；生物堿；茉莉酸甲酯；水楊酸

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.01.021

中圖分類號：R282.6 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2017）01-0087-04

Effects of Abiotic Elicitors MeJA and SA on Alkaloids Accumulation and Related Enzymes Metabolism in Pinellia ternata Suspension Cell Cultures DUAN Yong-bo， LU Fang， CUI Ting-ting， ZHAO Feng-lan， TENG Jing-tong， SHENG Wei， ZHANG Ai-min， XUE Jian-ping （Key Laboratory of Resource Plant Biology of Anhui Province， College of Life Sciences， Huaibei Normal University， Huaibei 235000， China）

Abstract： Objective To study the effects of abiotic elicitors methyl jasmonate （MeJA） and salicylic acid （SA） on the alkaloids accumulation and related enzymes metabolism in Pinellia ternata suspension cell cultures. Methods Using the leaf petioles-derived suspension cell cultures as the study object， the culture duration， concentrations of MeJA and SA were determined to get the optimal alkaloids accumulation， and the activities of metabolic enzymes IMP dehydrogenase and sAMP synthase were also measured. Results A 9-fold of dried biomass and a 3-fold of alkaloids accumulation were observed in P. ternata suspension cell cultures after culture for 21 d. Both MeJA and SA could significantly promote the accumulation of alkaloids in P. ternata suspension cells. 150 ?mol/L MeJA enhanced alkaloids content （4.7 mg/g DW） by 3.6 folds in comparison with control group， whereas 50 ?mol/L SA showed a 2.5-fold increase. Meanwhile， 100 ?mol/L MeJA and 50 ?mol/L SA promoted the increase in IMP dehydrogenase activity by 3.0 and 3.7 fold respectively， and 150 ?mol/L MeJA and 100 ?mol/L SA showed the increase by 2.6 and 4.4 fold respectively. Conclusion Proper adding exogenous MeJA and SA can promote the accumulation of alkaloids in Pinellia ternata suspension cell cultures.

Key words： Pinellia ternata； suspension cell cultures； alkaloids； methyl jasmonate； salicylic acid

半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.為天南星科

基金項目：國家自然科學基金（31501368、81573518）；安徽省自然科學基金（1408085MC58、1608085MC52）；安徽高校省級自然科學研究項目（KJ2016B016、KJ2015ZD35）

通訊作者：薛建平，E-mail：

多年生草本植物，其藥用功效最早記載于《神農本草經》。半夏以塊莖入藥，具有燥濕化痰、止咳鎮痛的作用，已成為我國最常用的十大中藥之一[1]。半夏富含生物堿、β-谷甾醇、多糖、揮發性油等，其中生物堿被視為其主要活性成分[2]。在半夏生物堿中，胡蘆巴堿含量常被作為半夏質量控制指示，肌苷則用作半夏的鑒別性成分[3-4]。

作為大宗中藥材，半夏年需求量達500～600萬kg，而野生和人工栽培產量僅能滿足1/3，市場缺口很大[5]。自然狀態下，半夏極少進行有性生殖，主要通過珠芽或塊莖進行營養繁殖，繁殖系數低[6]。長期過度采伐導致野生半夏資源瀕于枯竭，而人工栽培依然面臨高溫、干旱、病蟲害以及人工成本等多方面因素的影響，難以滿足半夏藥材的市場需求。

懸浮細胞可在人為控制條件下實現活成分的生產，為解決藥用植物資源不足和成本控制提供了新途徑[7]。茉莉酸甲酯（MeJA）和水楊酸（SA）為重要的信號分子[8]，常被用于植物次生代謝途徑研究。本研究以半夏懸浮細胞系為研究對象，考察外源MeJA和SA對生物堿合成和相關代謝酶活性的影響，以期為利用半夏懸浮細胞系生產生物堿提供依據。

1 儀器與試藥

YXQ-LS-50A立式壓力蒸汽滅菌器，上海博迅醫療生物儀器股份有限公司；HJH-C2112C超凈工作臺，上海智城分析儀器制造有限公司；QHZ-98B全溫度光照震蕩培養箱，太倉市華美生化儀器廠；BSA224S電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；752紫外可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；GZX-9240MBE電熱恒溫鼓風干燥箱，上海博迅醫療生物儀器股份有限公司；KQ-500超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（pH 5.4）、氯仿及溴麝草酚藍標準溶液，購自生工生物工程（上海）股份有限公司；6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、6-糠氨基嘌呤（KT）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水楊酸（SA）及鹽酸麻黃堿等試劑均為Sigma-Aldrich產品。試驗所用半夏植株采自淮北市龍脊山自然風景區（E-116°23′，N-34°14′），經薛建平教授鑒定為宿半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit。

2 方法與結果

2.1 半夏懸浮細胞體系構建

半夏愈傷組織誘導培養基為MS+3%蔗糖+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2，4-D+2.0 mg/L KT+0.65%瓊脂，pH 5.8；細胞懸浮培養基為MS+3%蔗糖+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2，4-D，pH 5.8[9]。愈傷組織誘導培養條件為25 ℃黑暗培養；懸浮細胞培養條件為（23±1）℃，光照周期為14 h/10 h光暗交替，光照強度為3000 lx。

取半夏葉柄置于0.1%氯化汞浸泡6 min，無菌水潤洗5次后剪成約1.0 cm長段，接種至愈傷誘導培養基，于25 ℃黑暗培養。3周后獲得愈傷組織，將所獲愈傷組織繼代培養3～5次。選取質地松脆的顆粒狀愈傷接種至液體培養基進行懸浮培養（100 r/min），每15 d更換新培養基，直至獲得穩定細胞系。將所獲細胞系在8 ℃低溫處理24 h，然后于25 ℃恢復培養36 h使細胞周期同步。之后在23 ℃培養9 d使同步化細胞進入對數生長期，獲得半夏懸浮細胞系。

2.2 鹽酸麻黃堿標準曲線的繪制

精密稱取10 mg鹽酸麻黃堿對照品溶解于氯仿中，定容至50 mL，搖勻，得0.20 mg/mL鹽酸麻黃堿對照品溶液。精密吸取0、1、2、3、4、5 mL至分液漏斗內，添加蒸餾水補至5 mL，分別精密加入5 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（pH 5.4）、10 mL氯仿及1 mL溴麝草酚藍標準溶液，充分振搖后靜置1 h，分取氯仿層，水層再用氯仿重復萃取2次，每次10 mL。合并氯仿層，60 ℃水浴回收至干，用氯仿溶解，定容至10 mL[10]。于414 nm波長處分別測定其吸光度。以鹽酸麻黃堿濃度（C）為橫坐標、吸光度（A）為縱坐標，求得標準曲線為A=0.062C-0.076 8，r2=0.996 0（n=5）。

2.3 生物堿含量測定

整個培養周期持續28 d，每隔7 d取樣，所獲樣品立即保存于-70 ℃冰箱供測試分析。將所收集懸浮細胞樣品于50 ℃干燥后研磨成粉。準確稱取0.1 g樣品粉末置于25 mL具塞試管中，加濃氨水0.5 mL潤濕，加氯仿10 mL后于4 ℃冷浸3 h；冰浴超聲提取1 h后過濾，殘渣以10 mL氯仿分3次（4、3、3 mL）洗滌；將濾液與洗液合并，回收氯仿至干，加入10 mL氯仿使其溶解并轉移至50 mL分液漏斗中，精密加入5 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH 5.4）和1 mL溴麝香草酚藍標準溶液，充分振搖后，靜置1 h。分取氯仿層，水層再用氯仿同法萃取2次，每次10 mL。合并氯仿層，回收至干，殘留物用氯仿溶解，置于10 mL容量瓶中，并用氯仿定容、搖勻，即得處理組溶液[11]。取待測溶液2.0 mL，用DU730 Beckman Coulter核酸蛋白分析儀測其吸光度，代入鹽酸麻黃堿標準曲線中，計算生物堿的含量。

2.4 培養時間對懸浮細胞系生物量和生物堿含量的影響

以半夏葉柄為外植體誘導愈傷組織，進行液體懸浮培養，獲得半夏懸浮細胞系。隨著培養時間延長，懸浮細胞干重總體呈現增長趨勢，在21 d時細胞干重為培養前9倍，之后有所下降（見圖1）；生物堿含量在培養7 d內含量較低，到14 d時顯著增加，21 d時最高，達到1.56 mg/g DW，之后生物堿含量開始降低（見圖2）。當培養時間超過28 d后，懸浮細胞會逐漸變為褐色，開始壞死。根據細胞生物量和生物堿含量測定結果，選擇21 d作為懸浮細胞培養時間。

2.5 茉莉酸甲酯和水楊酸對生物堿含量的影響

試驗用MeJA和SA濃度均為0、50、100、150、200 ?mol/L。MeJA處理對半夏懸浮細胞系生物堿含量有顯著影響。除50 ?mol/L處理外，所試其他MeJA濃度均顯著促進半夏生物堿合成。以150 ?mol/L MeJA處理組最高，達到4.7 mg/g DW。150 ?mol/L MeJA處理組的生物堿含量為對照組的3.6倍。在SA處理中，50和100 ?mol/L可顯著提高半夏懸浮細胞系中生物堿的合成，更高濃度的SA則能促進生物堿的累積。50 ?mol/L SA處理組生物堿含量最高，為對照組的2.5倍。結果見圖3。

2.6 茉莉酸甲酯和水楊酸對IMP脫氫酶和sAMP合成酶活性的影響

在添加不同濃度MeJA或SA培養21 d后，測定半夏懸浮細胞中IMP脫氫酶和sAMP合成酶活性。取不同濃度外源激素的半夏懸浮培養細胞各1.0 g置于預冷的研缽中，加提取介質在冰浴中研磨勻漿，4 ℃、1000 r/min離心15 min，上清液為酶粗提取液。將上述酶提取液加入相應的酶反應液，每隔30 s讀取吸光度值。酶活性以比活力表示，定義為1 min內1 mg蛋白所能引起的吸光度值變化的1000倍[5]。

添加MeJA或SA均對IMP脫氫酶活性有顯著影響。50～150 ?mol/L MeJA為對照組IMP脫氫酶活性2.6～3.1倍，當MeJA濃度增加至200 ?mol/L時，酶活性有所下降；50 ?mol/L SA處理對IMP脫氫酶活性影響最大，酶活性為對照組3.7倍，隨濃度增加酶活性逐漸下降。結果見圖4。

對于sAMP合成酶，50 ?mol/L MeJA對酶活性無顯著影響（P>0.05），而較高濃度的MeJA顯著提高酶活性（P

3 討論

生物堿為重要的次生代謝物，是許多藥用植物的主要活性成分。目前多種藥用植物細胞內生物堿合成及代謝規律逐步得以揭示，對于研究這些植物的藥用成分意義重大[12]。在諸多研究模式中，懸浮細胞系的應用極為廣泛[13-14]，因其可為藥用成分的生產提供另一途徑，有助于解決藥用植物產量的缺口，獲得更高質量的產品，同時保護野生資源。

本研究以葉柄來源的愈傷組織建立半夏懸浮細胞系，考察不同培養時間、MeJA和SA濃度對細胞中生物堿含量的影響，并分析生物堿合成相關酶活性。

在懸浮培養21 d時，半夏懸浮細胞干重增加了9倍，懸浮細胞中生物堿總量為培養0 d時的3倍，與Zhao J等[15]報道長春花懸浮細胞培養增殖結果接近。生物堿作為一種重要的次生代謝產物，其合成通常在細胞培養后期進行。添加較低濃度MeJA或SA不會影響半夏懸浮細胞的增殖，這在麻花艽懸浮細胞培養中同樣得到驗證[16]。同時，培養3周左右通常需要更換新鮮培養基，以補充營養成分并減少壞死細胞對培養的影響。因此，確定懸浮細胞系培養時間為21 d用于不同誘導子對生物堿累積影響的研究。

MeJA或SA作為重要的誘導子已用于萜類化合物等生物堿的代謝研究[17]。本研究表明，MeJA或SA處理均能顯著促進生物堿在半夏懸浮細胞中累積。培養21 d后，150 ?mol/L MeJA處理組生物堿含量為對照組3.6倍，50 ?mol/L SA處理組懸浮細胞生物堿含量達到對照組的2.5倍。同時測定了生物堿中嘌呤核苷酸生物合成途徑中的關鍵酶IMP脫氫酶和sAMP合成酶活性的變化情況。添加MeJA或SA均能顯著提高二者的酶活性。100 ?mol/L MeJA、50 ?mol/L SA處理使IMP脫氫酶活性分別為對照組3.0、3.7倍，150 ?mol/L MeJA、100 ?mol/L SA處理使sAMP合成酶活性分別為對照組2.6、4.4倍。比較生物堿累積量及所測代謝酶活性變化情況發現，生物堿累積與所測代謝酶活性變化趨勢較一致，說明IMP脫氫酶及sAMP合成酶在半夏生物堿代謝中具有較為重要的作用。

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篇5

服務外包產業是智力人才密集型現代服務業，具有信息技術承載高、附加值大、資源消耗低、環境污染小、國際化水平高等特點。大力培養服務外包人才，提高高校畢業生就業能力，有利于加快經濟發展方式的轉變，促進區域經濟協調發展，優化外貿結構，提高利用外資水平，對全面貫徹落實科學發展觀，實現“保增長、擴內需、調結構”的目標具有重要意義。

二、明確服務外包人才培養工作的目標

高校要根據服務外包產業快速發展的需要，調整服務外包人才培養結構，擴大服務外包人才培養規模，著力提高人才培養質量。服務外包產業涉及軟件研發、產品技術研發、工業設計、信息技術研發、信息技術外包服務、技術性業務流程外包等領域，各類高校要在相關專業開展服務外包人才培養工作，在高職高專、本科、研究生等層次培養高質量的服務外包人才，力爭在5年內培養和培訓120萬服務外包人才，新增100萬高校畢業生就業，實現2013年承接國際服務外包業務300億美元。

三、建立服務外包人才培養培訓體系

商務部和教育部負責聯合認定中國服務外包示范城市設立的“服務外包人才培訓中心”，并制定“服務外包人才培訓中心”、社會培訓機構、從業人員等標準。“服務外包人才培訓中心”負責組織協調當地高校、社會培訓機構、服務外包企業開展服務外包人才培養、培訓和實訓、實習工作。各地要加強對“服務外包人才培訓中心”、高校和社會培訓機構的政策支持，采取有效措施提升培養培訓質量，滿足服務外包企業用人要求。高校和社會培訓機構按照相關標準開展服務外包人才培養、培訓工作。鼓勵服務外包企業組織和接納高校學生實習和社會實踐。商務部和教育部定期公布服務外包企業錄用各個高校和經社會培訓機構培訓的高校學生數量。商務部、教育部會同有關部門建立服務外包人才庫，加強服務外包人才儲備。

四、調整專業結構適應服務外包產業需要

地方所屬高校的計算機科學與技術專業要以造就應用型人才為主要目標，大力培養服務外包人才。示范性軟件學院和示范性職業技術軟件學院要把培養服務外包人才作為一項十分重要的任務來完成，其中，示范性軟件學院以培養高端服務外包人才為主，促進中國服務外包產業的總體創新能力和競爭實力的提升。“中國服務外包示范城市”的各類高校應在服務外包產業所涉及的專業增設服務外包專業方向。

五、采取靈活措施培養服務外包人才

高校要根據服務外包產業所涉及專業的特點，采取靈活措施，按照國際先進技術和全球化的理念，探索多種模式培養服務外包人才。可在原有專業內開設服務外包專業方向，增設服務外包課程。可引入社會培訓機構開設服務外包課程。可將服務外包企業的崗位培訓前移至校內完成，幫助高校畢業生能夠直接上崗工作。

六、加強高校學生實習實訓工作

“中國服務外包示范城市”設立的“服務外包人才培訓中心“，要按照商務部和教育部聯合制定并的有關標準，認定符合條件的服務外包企業、社會培訓機構和高校為“服務外包大學生實訓實習基地”，實習實訓質量需得到參加實習實訓高校和企業的認可。高校要積極改革原有的實習模式，與服務外包企業共同制訂實習方案，共同指導學生實習。要簽訂學校、企業和學生的三方實習實訓協議，保護學生的合法權益，不能加重實習實訓學生的經濟負擔。服務外包企業要積極接收高校學生實習和勤工儉學。商務部、教育部將服務外包企業接收高校學生實習實訓工作情況作為服務外包示范城市評價的重要指標之一。

七、深化高校與服務外包企業的合作

教育部和商務部將邀請“中國服務外包示范城市”人民政府、服務外包企業和高校，成立服務外包校企合作聯盟，推進企業和高校的戰略合作。參加合作聯盟的有關企業和高校，在人才培養、產品和技術研發、高校畢業生就業等方面積極開展多邊和雙邊合作。各地要加強對合作聯盟的政策支持。合作聯盟要促進人才交流，根據校企達成的共識，鼓勵企業派遣工作經驗豐富的專家到學校兼職，高校派遣教師到服務外包企業掛職。

八、建立服務外包課程教師培訓網絡平臺

教育部將建立服務外包課程教師培訓網絡平臺，充分利用合作聯盟企業和高校的優質資源，大力培訓服務外包課程教師。高校要將教師參加培訓和到企業掛職計入教師工作量。

九、努力做好服務外包人才就業工作

要把推動服務外包產業發展促進高校畢業生就業放在突出重要的位置。各地商務、教育部門要按照每年促進服務外包領域全國新增20萬高校畢業生就業的目標，制訂本地區的具體工作目標及實施方案。商務部門要切實落實有關優惠政策，加強引導和服務，積極鼓勵服務外包企業吸納高校畢業生。教育行政部門要指導高校廣泛聯系并吸引服務外包企業到校園開展招聘活動；加強對畢業生的就業指導和宣傳引導，積極鼓勵高校畢業生到服務外包企業就業。服務外包企業和高校要充分利用全國大學生就業公共服務立體化平臺、中國服務外包網等信息平臺，及時高校服務外包相關專業及畢業生情況、服務外包企業招聘信息和接收高校學生實習的信息，增加高校畢業生到服務外包企業的就業機會。